28°C da 25 kunlik statik inkubatsiyadan so'ng, *Pleurotus ostreatus* NRC620 dan olingan lakkaza qo'ziqorin madaniyat muhitida eng yuqori faollikni ko'rsatdi. Ushbu ferment uchun optimal pH va harorat qiymatlari mos ravishda 3,0 va 70°C ni tashkil etdi. 40°C va 50°C da 2 soatlik inkubatsiyadan so'ng, ferment faolligi mos ravishda 68,33% va 59,61% ni saqlab qoldi. Sitrat-fosfat buferida (pH 7,0) 2 soatlik inkubatsiyadan so'ng, ferment faolligi 100% da qoldi. 10 mM MgSO₄ va CuSO₄ qo'shilishi ferment faolligini mos ravishda taxminan 21% va 35% ga oshirdi, NaCl, MnCl₂, KCl va CaCl₂ esa ferment faolligini inhibe qildi. ABTS dan substrat sifatida foydalanilganda, *Pleurotus ostreatus* NRC 620 lakkazining kinetik parametrlari (Km va Vmax) mos ravishda 1,99 mM va 16,217 μmol min−1 L−1 ni tashkil etdi. Olma sharbati namunalarini fermentativ qayta ishlash pH va yopishqoqlikni sezilarli darajada pasaytirdi va bu pasayish saqlash vaqtining oshishi bilan bog'liq edi. Lakka bilan ishlov berish olma sharbatining umumiy fenol miqdorini biroz pasayishiga olib keldi, ammo antioksidant faolligining pasayishi kuzatilmadi.
So'nggi yillarda tadqiqotchilar oziq-ovqat sanoatida yashil biotexnologiyani qo'llashga e'tibor qaratishdi. Lakkase oziq-ovqat sanoatidagi eng foydali fermentlardan biri bo'lib, sharbatni qayta ishlash, pishirish, vinoni barqarorlashtirish va oziq-ovqat mahsulotlarining organoleptik xususiyatlarini yaxshilash kabi sohalarda qo'llaniladi.1Ko'plab yuqori o'simliklar va mikroorganizmlar laksa ajratadi,2va deuteromitsetlar, askomitsetlar va basidiomitsetlar kabi zamburug'lar ham lakkaza ishlab chiqarishi mumkin.3Lakkase (EC 1.10.3.2) - bu uch xil mis atomlaridan iborat tizim yordamida molekulyar kislorodni suvga qaytaradigan va shu bilan turli fenolik birikmalar va aromatik aminlarni oksidlaydigan ko'k oksidaza. Meva va sabzavot sharbatlarini ishlab chiqarish jarayonida fermentativ va fermentativ bo'lmagan jigarrang rangga bo'yash juda muhim masalalardir.4Bu moddalar sharbatning rangi, ta'mi va xushbo'yligiga salbiy ta'sir ko'rsatganligi sababli, ularni olib tashlash kerak.5
Barcha mevalar orasida olma butun dunyoda va Yevropa Ittifoqida eng ko'p iste'mol qilinadigan meva hisoblanadi. 2019-yilda olma ishlab chiqarish 87 million tonnadan oshib, dunyo bo'ylab uchinchi o'rinni egalladi.6Olma tarkibida ko'plab fenolik birikmalar, jumladan, flavonoidlar va kofein kislotasi va xlorogen kislotasi kabi fenolik kislotalar mavjud.7Olma sharbati odatda tiniq shaklda iste'mol qilinganligi sababli, filtrlash jarayonida fenol tarkibiy qismlarining taxminan 50% dan 90% gacha yo'qoladi.8Bugungi kunda iste'molchilar polifenol miqdori yuqori bo'lgan bulutli olma sharbati kabi minimal ishlov berilgan mahsulotlarni tanlashga moyil. Biroq, uning yuqori fenol miqdori tufayli bu turdagi olma sharbati rangsizlanish va qorayishlarga ayniqsa moyil.9Olma sharbatining qorayishini kamaytirish yoki oldini olish uchun turli xil texnologiyalar, jumladan, 60-90°C da pasterizatsiya qilish kabi issiqlik bilan ishlov berish usullari qo'llaniladi.10Biroq, Sauceda-Gálvez tadqiqotiga ko'ra11, termik ishlov berish uchuvchan kimyoviy moddalarni yo'q qilishi va olma sharbatining organoleptik xususiyatlariga ta'sir qilishi mumkin. Termik ishlov berish usullariga alternativalar orasida o'ta kritik karbonat angidrid, ultrabinafsha nurlanish, ultratovush, yuqori gidrostatik bosim yoki yuqori bosimli gomogenizatsiya mavjud.12Ushbu texnologiyalarning samaradorligi va mos meva sharbatlarining hosildorligi ishlatiladigan parametrlar va mahsulot xususiyatlariga bog'liq. Ularning keng qo'llanilishi yuqori xarajatlar, ba'zi oziq-ovqat mahsulotlari sifatiga salbiy ta'sir ko'rsatishi yoki fermentlarning yetarlicha inaktivatsiya qilinmasligi bilan cheklangan.13,14
Lakkase meva sharbatini barqarorlashtirish va tiniqlashtirish uchun ishlatilishi mumkin.15Gökmen va boshqalar.16Meva sharbatini tiniqlashtirish uchun lakkazadan foydalanishni tavsiya qilamiz, chunki u fenol birikmalarini har qanday ultrafiltratsiya membranasi tomonidan osongina olib tashlanadigan polimerlar yoki oligomerlarga aylantirish orqali samarali ravishda yo'q qiladi, bu esa olma sharbatining 50°C da olti haftagacha barqaror rang va tiniqlikni saqlab turishiga imkon beradi. Tozalangan *Trichoderma* lakkazasi alyuminiy oksidi boncuklariga immobilizatsiya qilindi va olma sharbatining mikrobial ifloslanishi natijasida kelib chiqadigan yoqimsiz ta'mli birikmalarni tanlab olib tashlash uchun ishlatildi.17
Olma sharbatining uchuvchan tarkibiy qismlarining taxminan 80-90% efirlar va aldegidlar bo'lib, ular sharbatga o'ziga xos hid beradi.18*Trametes versicolor* dan olingan lakkase olma sharbatini tiniqlashtirish uchun yosh kokos po'stlog'idan olingan tabiiy toladan tayyorlangan arzon tayanchga immobilizatsiya qilindi.19Avvalgi tadqiqotlar olma sharbatining barqarorlashuvini (rangi va xiralashishi) fermentsiz yoki immobilizatsiya usullari yordamida yoki ultrafiltratsiya bilan birgalikda o'rgangan.5,19Biroq, saqlash vaqtida olma sharbatining fizik-kimyoviy xususiyatlariga qo'ziqorinli lakkazalarning ta'siri noma'lumligicha qolmoqda. Shuning uchun, ushbu tadqiqotning maqsadi qo'ziqorinli lakkazalar bilan ishlov berilgandan va ikki haftalik muzlatgichda saqlangandan keyin olma sharbatining fizik-kimyoviy xususiyatlari, fenol birikmalari tarkibi va antioksidant faolligidagi o'zgarishlarni eksperimental ravishda o'rganish edi. Lakkazalar fenol birikmalarini oksidlash qobiliyatiga ega, bu ularni turli sanoat jarayonlarida, jumladan, sharbatni tiniqlashtirishda foydalanish uchun istiqbolli qiladi. Ushbu tadqiqotda *Pleurotus ostreatus* NRC 620 dan olingan lakkazalar o'rganildi, ularning faolligi va sharbatni tiniqlashtirishdagi samaradorligi uchun ideal sharoitlarga e'tibor qaratildi. Ustritsa qo'ziqorinlari (P. ostreatus NRC 620) bo'yicha tadqiqotlar hali ham cheklangan bo'lsa-da, avvalgi tadqiqotlar Trametes versicolor va Ganoderma lucidum kabi turli qo'ziqorin manbalaridan olingan fermentlarni o'rgangan. Ushbu tadqiqotning maqsadi ushbu fermentning oziq-ovqat sanoatida potentsial qo'llanilishini baholash va uning noyob xususiyatlarini, xususan, ideal pH qiymati va haroratini ta'kidlash edi.
2,2′-Azooksibis(3-etilbenzotiazolin-6-sulfon kislotasi) (ABTS) Sigma-Aldrich (Kanada) dan sotib olindi. Boshqa barcha reagentlar analitik darajadagi edi.
Milliy tadqiqot markazining Mikrobial madaniyat yig'ish markazi ma'lum bo'lgan ustritsa qo'ziqorini NRC620 shtammini oldi. Subkulturadan so'ng, bu shtamm kartoshka dekstroza agarining qiyaliklarida 4°C da saqlandi. Emlash usuli quyidagicha edi: 10 kunlik, to'liq rivojlangan miselyum kartoshka dekstroza agar plastinkalariga emlandi va 28°C da inkubatsiya qilindi. 10 kundan so'ng, agar muhitidan steril metall shtamp yordamida uchta 12 mm diametrli miselyum bloklari olib tashlandi va 50 ml sterilizatsiya qilingan madaniyat muhiti (pH 5.0, avval Othman va boshqalar tomonidan tasvirlanganidek) solingan paxta tiqinlari bilan 250 ml Erlenmeyer kolbalariga joylashtirildi.20). Kulturalar 28°C da 18 kun davomida inkubatsiya qilindi. Keyin kulturalar Whatman №1 filtr qog'ozi orqali filtrlandi va natijada hosil bo'lgan supernatant ferment manbai bo'lib xizmat qildi.
Lakkaza faolligi substrat sifatida ABTS yordamida aniqlandi. Reaksiya aralashmasi (2 ml) tarkibida 500 mkl 0,3 mM ABTS (0,1 M natriy sitrat buferida eritiladi, pH 4,5) va distillangan suv bilan suyultirilgan ferment namunasining kerakli miqdori mavjud edi.21,22Lakkaza xona haroratida (28 °C ± 2) ABTS ni oksidlashi mumkinligini hisobga olsak, ABTS oksidlanishi 420 nm da (ε) absorbsiyaning oshishini o'lchash orqali aniqlandi.420= 36 000 sm-1 M -1) Agilent Carry-100 UV spektrofotometri yordamida. Daqiqada 1 mkmol ABTS ni oksidlash uchun lakkaza faolligining bir birligi kerak edi. Oqsil konsentratsiyasi ichki nazorat sifatida sigir zardobidagi albumin yordamida Bredford usuli bilan aniqlandi.23,24
Ustritsa qo'ziqorini NRC 620 shtammidan ferment olingandan so'ng, uning faolligi 28 °C da statik sharoitlarda 25 kun davomida turli xil kultivatsiya intervallarida o'lchandi.
Haroratning lakkaza faolligiga ta'sirini o'rganish uchun 20 dan 90 °C gacha bo'lgan harorat oralig'ida tajribalar o'tkazildi. Fermentni qo'shish va reaksiyani boshlashdan oldin, bufer (0,1 M natriy sitrat, pH 4,5) va substrat (ABTS) aralashtirildi va turli haroratlarda 5 daqiqa davomida inkubatsiya qilindi. Fermentning termal barqarorligi 0,05 M natriy fosfat buferida (pH 7,0) mos ravishda 40, 50, 60 va 70 °C da 2 soat davomida inkubatsiya qilish orqali baholandi. Keyin qoldiq faollik ABTS substrati yordamida baholandi.
pH ning lakkaza faolligiga ta'siri pH qiymati 2,5 dan 7,0 gacha bo'lgan 0,1 M sitrat-fosfat buferlarida substrat sifatida ABTS yordamida baholandi. Ferment eritmasi pH barqarorligini baholash uchun 40°C da ikki soat davomida 0,1 M sitrat va Tris buferlarida (pH 3, 4, 6 va 7) inkubatsiya qilindi. Substrat sifatida ABTS bilan qoldiq faollik inkubatsiyadan so'ng hisoblab chiqildi.
Lakkaza mos ravishda 2,5 mM va 10 mM konsentratsiyalarda turli metall ionlarini (Mg2+, Cu2+, Co2+, Ca2+, Zn2+, K+, Na+ va Mn2+) o'z ichiga olgan natriy fosfat buferida (0,05 M, pH 7,0) 10 daqiqa davomida inkubatsiya qilindi. Keyin reaksiyani boshlash uchun substrat (ABTS) qo'shildi va nisbiy faollik baholandi.
Kinetik parametrlarni (Vmax va Km) aniqlash uchun pH 4.5 da turli konsentratsiyalarda (0.025–3 mM) lakkaza bilan ABTS oksidlanishi o'lchandi.konstantalarMichaelis-Menten tenglamasining qiymatlari Lineweaver-Burk grafigi yordamida hisoblab chiqilgan bo'lib, u reaksiya tezligining substrat konsentratsiyasi funksiyasi sifatida teskari qiymatini chizadi. Kinetik konstantalar GraphPad Prism 6.01 versiyasi dasturi yordamida Lineweaver-Burk grafigidan hisoblab chiqilgan.
Olmalar jo'mrak suvi bilan yaxshilab yuvilgandan so'ng, ular ikkiga bo'lindi va to'liq avtomatik Braun MP80 olma sharbat chiqargichi (Germaniyada ishlab chiqarilgan) yordamida sharbat chiqarildi. Sharbat to'rt qatlam doka orqali filtrlandi. Nazorat guruhiga hech qanday ferment qo'shilmadi, yangi tayyorlangan olma sharbatiga 2,0% lakkaza (sinovdan o'tgan eng samarali konsentratsiya) qo'shildi va keyin u 4°C da ikki hafta davomida saqlandi.
Titrlanadigan kislotalilik (TA) va pH Boulton va boshqalar usuli bo'yicha aniqlandi.al.27Har bir namunaning pH qiymati raqamli pH o'lchagich (JENWAY 3510 pH o'lchagich) yordamida o'lchandi. Titrlanadigan kislotalilik (TA) quyidagi formula yordamida olma kislotasi asosida hisoblab chiqildi.
bu yerda V va C mos ravishda titrlashda ishlatiladigan natriy gidroksid eritmasining hajmi (ml) va konsentratsiyasi (0,1 mol/L). K - olma kislotasining konversiya koeffitsienti, 0,067 ga teng, W esa olma sharbatining massasi (g).
Umumiy eriydigan qattiq moddalar (TDS) barcha sharbat namunalarining tarkibi PAL-1 cho'ntak refraktometri (ATAGO, Tokio, Yaponiya) yordamida aniqlandi. Har bir o'lchovdan so'ng, optik linza deionizatsiyalangan suv bilan yuvildi va har bir olma sharbati namunasi uch marta sinovdan o'tkazildi. Har bir namunaning qiymati uchta o'lchovning o'rtacha qiymatini hisoblash yo'li bilan hisoblandi. Har bir olma sharbati namunasi uchun o'rtacha ± standart og'ish ham ushbu natijalarni o'rtacha hisoblash yo'li bilan hisoblandi.
Olma sharbati namunalarining viskoelastikligi aylanma viskozimetr (RV, Rheotest 2, Germaniya) yordamida baholandi. Namuna viskozimetrning “S2” silindriga joylashtirildi. Ko'rinadigan yopishqoqlik kesish kuchlanishi va kesish tezligi egri chizig'ining qiyaligi bilan ifodalangan bo'lib, u kesish kuchlanishi va turli kesish tezliklarida (1,00 dan 437,4 s⁻¹ gacha) mos keladigan egri chiziqlardan hisoblangan. Ko'rinadigan yopishqoqlikni hisoblash formulasi quyidagicha:
Bu yerda η ko'rinadigan yopishqoqlik (cP), τ siljish kuchlanishi (dyn/sm²), γ siljish tezligi (sek⁻¹) va (τ) quyidagi formula yordamida moment (α) va silindr (Z) qiymatlari yordamida hisoblanadi: τ = Z α.
Qizartirish indeksi Meidav va boshqalar usuli bo'yicha aniqlandial.2910 ml sharbat namunasi 2750 xg da 10 daqiqa davomida santrifuga qilindi. 5 ml sharbat supernatanti 5 ml 95% etanol bilan aralashtirildi. Aralashmaning yutilishi 420 nm da Shimadzu UV spektrofotometri (UV-1601 PC) yordamida o'lchandi.
Umumiy fenol miqdori (TPC) Boulton va boshqalar tomonidan tasvirlanganidek, Folin-Ciocalteu reaktivi yordamida kolorimetrik tarzda aniqlandi.[27]0 dan 500 mg/L gacha bo'lgan konsentratsiyalar uchun gallik kislotaning standart egri chizig'i tuzildi (r²= 0.997). Natijalar gallik kislota ekvivalentlari sifatida ifodalanadi (mg GAE/ml).
25 mkl olma sharbatiga 125 mkl distillangan suv va 2850 mkl FRAP eritmasini qo'shing va aralashmani qorong'i joyda qoldiring.30min. Keyin Shimadzu UV spektrofotometri (UV-1601 PC) yordamida 593 nm da absorbansni o'lchang. FRAP reagenti 300 mM asetat buferi (pH 3.6), 20 mM temir(III) xlorid va 10 mM 2,4,6-tris(2-piridil)triazin (TPTZ) (40 mM HCl da erigan) ni 10:1:1 nisbatda aralashtirish orqali tayyorlandi. Standart egri chiziq Trolox yordamida standart (R²= 0.999), va natijalar μM Trolox/ml sifatida ifodalanadi.
Qayta ishlangan va ishlov berilmagan sharbatlarning antioksidant faolligi DPPH erkin radikallarini tozalash qobiliyatini baholash uchun DPPH usuli yordamida aniqlandi.31O'n mikrolitr sharbat metanoldagi 1 ml DPPH eritmasi (100 μM) bilan aralashtirildi. Qorong'ida 30 daqiqa davomida reaksiya o'tkazilgandan so'ng, aralashmaning yutilishi Shimadzu UV spektrofotometri (UV-1601 PC) yordamida 517 nm da o'lchandi. Natijalar kalibrlash egri chizig'iga asoslangan holda trolox ekvivalentlari (μM trolox/ml) sifatida ifodalandi (R2= 0.990).
Olingan ma'lumotlar shuni ko'rsatdiki, NRC 620 istiridye qo'ziqorinlarida maksimal lakkaza ishlab chiqarish fermentatsiyaning 18-kunining oxiriga kelib kuzatilgan va 1302 U/L faollikka erishgan. Bu lakkaza ishlab chiqarish uchun optimal yetishtirish vaqtini aniqlash uchun asos bo'lib xizmat qildi (1-rasm). Ferment ishlab chiqarish yetishtirish vaqtining oshishi bilan oshgan bo'lsa-da, o'sish sur'ati yetishtirish vaqtiga to'g'ridan-to'g'ri mutanosib emas edi; 21 kundan keyin ferment faolligi atigi 90 U/L ga oshdi (1390 U/L gacha). Shuning uchun, mahsulot hosildorligini yetishtirish vaqtining ko'payishining iqtisodiy foydalari bilan muvozanatlash uchun oxir-oqibat 18 kun optimal yetishtirish vaqti sifatida tanlandi.
Pleurotus ostreatus NRC 620 da kultivatsiya vaqtining lakkaza hosildorligiga ta'siri. Uchta (12 mm) qo'ziqorin mitselial bloklari 50 ml steril muhitga emlandi va keyin 28 °C da turli vaqtlarda kultivatsiya qilindi.
Boshqa tadqiqotlar bilan mos ravishda, bizning natijalarimiz shuni ko'rsatadiki, zamburug'lar tomonidan lakkaza sekretsiyasining eng yuqori cho'qqisiga erishish uchun ideal madaniyat davri 7 kundan 36 kungacha bo'lishi mumkin.32Ezike va boshqalarning fikriga ko'ra.33, *Trametes polyzona* WRF03 fermentatsiyaning to'qqizinchi kunining oxiriga kelib, 1637 U/mg oqsilning o'ziga xos faolligi bilan eng yuqori miqdorda lakkaza ishlab chiqardi. Bundan tashqari, Othman va boshqalar.34*Trichoderma harzianum* S7113 beshinchi kunida ko'p miqdorda lakkaza ajratganini aniqladi. Lakkaza ishlab chiqarish darajasi o'n to'rtinchi kuni eng yuqori faollikka erishdi va keyin asta-sekin pasaydi.34Ferment sekretsiyasi asosiy o'sish bosqichida ham sodir bo'lishi mumkin bo'lsa-da, u odatda oraliq bosqichda eng yuqori cho'qqiga chiqadi va uglerod yoki azot manbasini iste'mol qilish natijasida yuzaga keladi.34,35
Pleurotus ostreatus NRC 620 dan olingan lakkaza 50°C dan 80°C gacha bo'lgan keng harorat oralig'ida yuqori faollikni namoyon etgan bo'lsa-da, eng yuqori faollikka yaqinlashgan (69–98%), uning maksimal faolligi 70°C da kuzatilgan (2a-rasm). Ushbu harorat oralig'idan tashqarida ferment faolligi taxminan 70°C da pasaygan. Bu natijalar fermentning yuqori haroratlarda faol ekanligini ko'rsatadi, chunki yuqori harorat reaksiyaning kinetik energiyasini oshiradi.
*Pleurotus ostreatus* NRC 620 da reaksiya harorati (a) va pH (b) ning lakkaza faolligiga ta'siri. Fermentni qo'shish va reaksiyani boshlashdan oldin aralashmani 5 daqiqa davomida turli haroratlarda oldindan inkubatsiya qilish orqali 20 dan 90 °C gacha bo'lgan haroratga erishildi. pH ning lakkaza faolligiga ta'siri ABTS yordamida 2,5 dan 7,0 gacha pH oralig'ida 0,1 M sitrat-fosfat buferini o'z ichiga olgan eritmalarda substrat sifatida baholandi.
Ezike va boshqalarga ko'raal.33, *Trametes polyzona* WRF03 lakkase uchun optimal harorat 55 °C ni tashkil qiladi, bu *Ganoderma lucidum* uchun bo'lgani kabi bir xil.laccase36va *Trametes polyzona* KU-RNW02737 uchun optimal haroratga (50 °C) o'xshashlakkase . Baldrian38boshqa ligninni parchalovchi ferment tizimlarida bo'lgani kabi, lakkaza uchun ideal harorat oralig'i 50 dan 70 °C gacha ekanligini ta'kidlaydi.
Natijalar shuni ko'rsatdiki, ferment pH 3.0 da eng yuqori faollikni namoyon etdi va pH 3.5 da 94% faollikka erishdi. Biroq, u 2.5 dan 7.0 gacha bo'lgan keng pH diapazonida faol bo'lib qoldi (2b-rasm). Bundan tashqari, u neytral yoki ishqoriy sharoitlarga nisbatan kislotali sharoitlarda yuqori faollikni namoyish etdi. Uning faolligi 2.5 dan 4.5 gacha bo'lgan pH oralig'ida kamida 77% ni tashkil etdi, ammo pH 7.0 da atigi 38% ga yetdi. *Trametes polyzona* WRF03 dan olingan lakkaza uchun optimal pH 4.533 ni tashkil etdi, bu *Trametes polyzona* KU-RNW02737, *Trichoderma harzanium* 39, *Pleurotus* sp. 40 va *Trametes hirsuta* 41 dan olingan lakkazalar uchun pH bilan bir xil. Biroq, Chairin va boshqalar tomonidan o'tkazilgan tadqiqotga ko'ra.42, *Polymorpha f. sp.* WR710-1 dan olingan lakkaza uchun optimal pH qiymati 2,2 ga teng, *Polymorpha f. sp.* IBL-04 dan olingan lakkaza uchun optimal pH qiymati esa 5,043 ga teng. Gidroksid anionlarining (lakkaza inhibitori) T2/T3 lakkazasining mis atomlariga bog'lanishi neytral yoki ishqoriy pH sharoitida lakkaza faolligining pasayishiga sabab bo'lishi mumkin. Bu T1 markazidan T2/T3 markaziga ichki elektron o'tkazilishini buzishi mumkin, shu bilan...cheklovchiferment faolligi 23,44
Fermentni turli haroratlarda inkubatsiya qilish orqali inkubatsiya vaqti ham, harorat ham ferment barqarorligiga ta'sir qilishi aniqlandi. Shunisi e'tiborga loyiqki, *Trametes polyzona* NRC 620 dan olingan lakkaza 40℃ va 50℃ da yuqori barqarorlikni namoyish etdi va 120 daqiqadan so'ng mos ravishda dastlabki faolligining 68,33% va 59,61% ni saqlab qoldi (3a-rasm). Aksincha, xuddi shu sharoitlarda (40℃ va 50℃, 120 daqiqa), *Trametes polyzona* WRF03 dan olingan lakkaza mos ravishda 64,38% va 42,92% faolligini saqlab qoldi.33Aksincha, inkubatsiya vaqti va haroratining oshishi *Trametes polyzona* NRC 620 lakkazasining barqarorligini pasaytirdi; 60℃ va 70℃ da 60 daqiqa davomida inkubatsiya qilingandan so'ng, uning faolligi mos ravishda 39,24% va 1,72% gacha pasaydi (3a-rasm). Tajriba natijalariga muvofiq, *Trametes polyzona* WRF03 dan olingan lakkaza butun termik ishlov berish jarayonida 40 va 50℃ da yuqori barqarorlikni ko'rsatdi.33Xuddi shunday, Lueangjaroenkit va boshqalaral.37va Chairin va boshqalaral.42Trametes polyzona KURNW027 va Trametes polyzona WR710-1 dan olingan lakkazalarning 50 °C da mos ravishda 1 soat davomida barqarorligi haqida xabar berilgan. Turli biotexnologik sohalarda qo'llaniladigan foydali biokatalizator sifatida lakkaza keng harorat oralig'ida yaxshi barqarorlik va ishlashga ega bo'lishi kerak.
*Pleurotus ostreatus* NRC 620 dan olingan lakkazaning termostatik barqarorligi (a) va pH barqarorligi (b). Termostatik barqarorlik ferment eritmasini mos ravishda 0,05 M natriy fosfat buferida (pH 7,0) 40, 50, 60 va 70 °C da 2 soat davomida inkubatsiya qilish orqali baholandi. pH barqarorligi ferment eritmasini 0,1 M sitrat buferida va Tris buferida (pH 3, 4, 6 va 7) 40 °C da 2 soat davomida inkubatsiya qilish orqali baholandi. Qoldiq faollik inkubatsiyadan keyin substrat sifatida ABTS yordamida hisoblab chiqildi.
Fermentlardan foydalanish va saqlash uchun optimal sharoitlarni aniqlash uchun biz pH ning lakkaza barqarorligiga ta'sirini o'rganib chiqdik. Turli pH qiymatlariga ta'sir qilish oqsil tuzilishining barqarorligiga sezilarli darajada ta'sir qildi va shu bilan ferment molekulasining barqarorligi va faolligiga ta'sir qildi. Natijalar shuni ko'rsatdiki, ferment kislotali sharoitlarda kamroq barqaror edi, yuqori pH qiymatlarida (neytral va ishqoriy mintaqalar) esa yaxshiroq barqarorlikni ko'rsatdi. 7,0, 6,0, 4,0 va 3,0 pH qiymatlarida 120 daqiqadan so'ng fermentni ushlab turish darajasi mos ravishda taxminan 100%, 62,54%, 52,39% va 11,14% ni tashkil etdi (3b-rasm). *Strombus multisus* WRF03 lakkazasi neytral pH qiymatlarida (5,5–6,5) yuqori barqarorlikni va kislotali pH qiymatlarida (4,0 dan past) pastroq barqarorlikni ko'rsatdi. 5,5, 6,0 va 6,5 pH qiymatlarida 120 daqiqadan so'ng, fermentni ushlab turish darajasi mos ravishda taxminan 82%, 100% va 93% ni tashkil etdi.33Xayrin va boshqalar.42Trametes polyzona WR710-1 dan olingan lakkaza 6,0 dan 7,0 gacha pH oralig'ida barqaror ekanligini ta'kidladi, Sayed va boshqalar esa.45lakkaza neytral pH sharoitida barqarorroq ekanligini ko'rsatdi. Biroq, Cerrena unicolor lakkazasi ishqoriy sharoitlarda ham barqarorlikni namoyish etdi (pH 9.0)46O'rganilgan lakkazalar keng pH diapazonida yuqori barqarorlikni ko'rsatdi. Bu sanoat qo'llanmalari uchun muhim xususiyat bo'lishi mumkin.
Ba'zi metall ionlari ferment faolligiga ham rag'batlantiruvchi, ham inhibitiv ta'sir ko'rsatganligi sababli, ularning ferment faolligiga ta'siri sanoat qo'llanmalarida ko'rib chiqilishi kerak. Bu juda muhim, chunki metall ionlari hujayradan tashqari fermentlarning barqarorligi va sinteziga ta'sir qilishi mumkin bo'lgan keng tarqalgan atrof-muhit ifloslantiruvchi moddalaridir.47*Pleurotus ostreatus* NRC 620 dan olingan lakkazaga bir nechta metall ionlarining ta'sirini o'rganish uchun biz tegishli tajribalar o'tkazdik. 4-rasmda ko'rsatilganidek, ishlatilgan metall turiga qarab, metall ionlari konsentratsiyasini 2,5 mM dan 10 mM gacha oshirish ferment funktsiyasiga salbiy ta'sir ko'rsatdi. Masalan,Mg²⁺ , Co²⁺ , Zn²⁺vaCu²⁺ferment faolligini rag'batlantirishi va faollashtirishi mumkin, shu bilan birgaNa⁺ , Mn²⁺ , Ca²⁺vaK⁺ferment faolligini susaytirishi mumkin edi. 10 mM konsentratsiyada Cu²⁺ va Mg²⁺ ionlari *Pleurotus ostreatus* NRC 620 dan olingan lakkaza faolligining eng kuchli faollashtiruvchilari bo'lib, mos ravishda taxminan 34% va 20% faollashuv darajasini ta'minladi. Biroq, 10 mM konsentratsiyada Ca²⁺ ionlari lakkazaning eng kuchli inhibitori bo'lib, ferment faolligini taxminan 60% ga kamaytirdi.
Metall ionlarining Pleurotus ostreatus NRC 620 lakkazasining faolligiga ta'siri. Lakkaza 2,5 mM va 10 mM konsentratsiyalarda turli metall ionlarini o'z ichiga olgan natriy fosfat buferida (0,05 M, pH 7,0) 10 daqiqa davomida inkubatsiya qilindi. Keyin reaksiya substrat (ABTS) qo'shilishi bilan boshlandi, shundan so'ng nisbiy faollik o'lchandi.
Bizning natijalarimiz Mg²⁺ va Cu²⁺ *Trametes polyzona* WRF03³ faolligini oshirishini aniqlagan boshqa mualliflarning natijalari bilan mos keladi. Castaño va boshqalar⁴⁸ *Xylaria* sp. dan olingan lakkaza ma'lum darajada mis ionlari (Cu²⁺) tomonidan rag'batlantirilishini aniqladilar. Bundan tashqari, Foroutanfar va boshqalar⁴⁹ va Si va boshqalar⁵⁰ mos ravishda *Paraconiothyrium variabile* va *Trametes pubescens* dan olingan lakkazalar bo'yicha shunga o'xshash tadqiqotlar o'tkazdilar. Ushbu fermentning II turdagi mis bilan bog'lanish joyi (T2) ma'lum bir konsentratsiyada Cu²⁺ bilan to'yingan bo'lishi mumkin, bu esa yuqori Cu²⁺³⁹ konsentratsiyalarida lakkaza faolligining rag'batlantirilishini tushuntirishi mumkin. Oq chirigan zamburug'larning lakazalari bir nechta mis atomlarini o'z ichiga olgan oksidazalar bo'lganligi sababli, mis ionlarining lakaza faolligiga ta'siri xilma-xil bo'lib, stimulyatsiya qiluvchi va inhibitivdan neytralgacha bo'ladi.⁵¹ Aksincha, Zhou va boshqalar. [52]xabar berdiCu²⁺Tayvan yer osti termitining (Odontotermes formosanus) lakkaza faolligini inhibe qildi. Biroq, Cerena sp. HYB07 lakkazalari[53]va Clitocybe maxima[54]mis ionlari ta'sir qilmagan.
Substratning o'ziga xosligi uning kinetik parametrlari (Km va Vmax) bilan ifodalangan; substratning fermentga bog'lanish yaqinligi qanchalik kuchli bo'lsa, Km qiymati shunchalik past va substratning o'ziga xosligi shunchalik yuqori bo'ladi.3,21,55*Pleurotus ostreatus* NRC 620 dan olingan lakkazaning kinetik parametrlari (Km va Vmax) GraphPad Prism 6.0 dasturi yordamida Lineweaver-Burk grafigini chizish orqali aniqlandi (5-rasm). ABTS substrat sifatida ishlatilganda natijalar 1,99 mM va 16217 μmol ni tashkil etdi.min⁻¹ L⁻¹,mos ravishda. Elsayed va boshqalar.21ABTS oksidlanishining Km qiymatlari mos ravishda 0,1 mM va 0,064 mM ekanligini xabar qildi, bu Lac A va Lac B izoenzimlarining ABTS uchun yuqori yaqinligini ko'rsatadi. Bundan tashqari, Vmax qiymatlari 0,182 mkmol ni tashkil etdi.min⁻¹va 0,603 mkmolmin⁻¹mos ravishda. Olingan Km qiymati Trametes polyzona WRF03 nikidan (8,66 mM) pastroq edi; bundan tashqari, ularning Vmax qiymati (1429 mmol min⁻¹) hampastkiABTS ni substrat sifatida ishlatganda.33 Xuddi shunday, Lentinus squarrosulus MR13 va Trametes sp. AH28-2 lakkaza konsentratsiyalarining Km qiymatlari mos ravishda 0,0714 mM va 0,025 mM ni, Vmax qiymatlari esa 0,0091 mM min−1 va 0,67 mM min−1 mg−1 ni tashkil etdi (ABTS ga nisbatan)mos ravishda.56,57
ABTS konsentratsiyasining *Pleurotus ostreatus* NRC 620 dan olingan lakkaza faolligiga ta'siri o'rganildi va boshlang'ich reaksiya tezligi va ABTS konsentratsiyasining o'zaro qiymatining Lineweaver-Burk grafigi chizildi. Kinetik parametrlarni (Vmax va Km) aniqlash uchun turli konsentratsiyali (0,025–3,0 mM) lakkaza bilan ABTS ning oksidlanish reaksiyasi pH 4,5 da o'lchandi. Michaelis-Menten kinetik konstantalari reaksiya tezligi va substrat konsentratsiyasining o'zaro qiymatining Lineweaver-Burk grafigi yordamida hisoblab chiqildi. Kinetik konstantalar GraphPad Prism 6.01 dasturi yordamida Lineweaver-Burk grafigidan hisoblab chiqildi.
Pektinazalar kabi an'anaviy tiniqlashtiruvchi fermentlar pektik moddalarni gidrolizlaydi, yopishqoqlik va xiralikni kamaytiradi. Ular strukturaviy polisaxaridlarni samarali ravishda parchalaydi va ko'pincha hosildorlik va tiniqlikni oshirish uchun tsellyulaza va gemitsellyulaza kabi boshqa fermentlar bilan birgalikda qo'llaniladi. Biroq, pektinazalar, ayniqsa olma va uzum sharbati kabi sharbatlarda xiralik va oksidlovchi jigarranglikka asosiy hissa qo'shadigan fenolik birikmalarni aniq nishonga olmaydi.58Aksincha, lakkazalar fenolik birikmalarning oksidlanishini katalizlaydi, ularni cho'ktirish yoki filtrlash orqali olib tashlanishi mumkin bo'lgan kattaroq, erimaydigan molekulalarga polimerlaydi. Bu mexanizm nafaqat tiniqlikni yaxshilaydi, balki fenolik birikmalar keltirib chiqaradigan oksidlovchi jigarranglik ehtimolini kamaytirish orqali sharbatning saqlash muddatini ham uzaytiradi. Bundan tashqari, lakkaza asosidagi tiniqlashtirish jarayonlari yumshoq ishlov berish sharoitida (pH 3,5–5,5, harorat 25–40 °C) amalga oshirilishi mumkin, bu esa ularni ozuqaviy yoki organoleptik xususiyatlariga putur yetkazmasdan nozik sharbatlar uchun mos qiladi.59Tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, pektinaza bilan ishlov berish sharbatni 1-2 soat ichida tiniqlashtirishi mumkin, lakkaza bilan ishlov berish esa odatda fenol birikmalarini to'liq kamaytirish uchun ko'proq reaksiya vaqtini (3-6 soat) talab qiladi. Biroq, bu jarayonni fermentni immobilizatsiya qilish yoki lakkazani mexanik tiniqlashtirish usullari bilan birlashtirish orqali optimallashtirish mumkin.60Ushbu tadqiqotda xom ekstraktning ferment profilini aniqlash natijasida sezilarli lakkaza va α-amilaza faolligi aniqlandi, pektinaza va ksilaza faolligi esa juda past edi va tsellyulaza faolligi aniqlanmadi. Shuning uchun, xiralik va fenol miqdorining pasayishi asosan lakkaza ta'sirida bo'lgan, yopishqoqlikning o'zgarishi esa qisman amilaza ta'sirida bo'lishi mumkin.
1-jadvalda yangi siqilgan olma sharbati va lakkaza bilan ishlov berilgan namunalarning fizik-kimyoviy parametrlari ko'rsatilgan. Natijalar shuni ko'rsatdiki, yangi siqilgan olma sharbatining hosildorligi (71,59%) lakkaza bilan ishlov berilgan namunalarnikidan (87,34%) pastroq edi. Bu natijalar Pilnik va Orange tadqiqotlarining natijalariga mos keladi.61, mevalarni qayta ishlashda fermentlardan foydalanish sharbat hosildorligini oshirishi, filtrlashni yaxshilashi va konsentratsiya uchun yuqori sifatli, tiniq sharbat olishi mumkinligini ko'rsatdi. Sharbat hosildorligining oshishi asosan sharbat tarkibidagi eriydigan shakar miqdorining ortishi bilan bog'liq. Mevalarning fermentativ gidrolizi paytida mahsulotning hujayra devorlaridagi mezoglea va pektin yo'q qilinadi va neytral shakar va kislotalar kabi eriydigan moddalarga aylanadi.62.Ferment bilan ishlov berilgan olma sharbatining pH qiymati nazorat guruhidagiga qaraganda ancha past edi (P < 0,05) va saqlash vaqtida ikkala guruhning pH qiymati sezilarli darajada oshdi (1-jadval). Bu natijalar Mark va boshqalarning natijalariga mos keladi.63, issiqlik bilan ishlov berilgandan keyin saqlangandan keyin kaju meva sharbatining pH qiymati pasayganini ta'kidladi. Pektin parchalanishi va ferment bilan ishlov berilgandan keyin galakturon kislotasining hosil bo'lishi saqlash paytida pH ning oshishiga sabab bo'lishi mumkin. Ferment bilan ishlov berilgan namunalarning pH qiymati saqlash davomida 4,05 dan 4,31 gacha, ishlov berilmagan olma sharbatining pH qiymati esa 4,12 dan 4,33 gacha bo'lgan.
Ishlov berilmagan va lakkaza bilan ishlov berilgan namunalarning umumiy kislotaliligi (TA) saqlash vaqtining oshishi bilan pasayish tendentsiyasini ko'rsatdi (1-jadval). Kislotaning pasayishi organik kislotalarning uglevodlarga aylanishi yoki fermentativ reaksiyalar, shuningdek, sharbatni saqlash paytida oksidlanish bilan bog'liq.64Nazorat olma sharbati va ferment bilan ishlov berilgan namunalarning umumiy kislotaliligi boshqa sharbatlarnikidan pastroq edi (qulupnay sharbati 0,9%, olxo'ri sharbati 2,2%, kumquat sharbati 1,0%, o'rik sharbati 2,4%, apelsin sharbati 0,8%), ammo boshqa sharbatlarnikiga o'xshash edi (masalan, nok sharbati 0,3%).62Ishlov berilmagan yangi siqilgan olma sharbatidagi bu farqlar o'sish sharoitlari, genetik omillar, yetuklik darajasi va qayta ishlash usullari kabi turli omillarga bog'liq bo'lishi mumkin.65Nazorat va lakkaza bilan ishlov berilgan olma sharbatining umumiy kislotaliligining pasayishi Singh va boshqalar tomonidan taqdim etilgan natijalarga mos keladi.66Jin Nuo olma sharbatining 74 kunlik saqlashdan keyin umumiy kislotaliligining pasayishi haqida. Boshqa tomondan, Oshmianskiy va Vojdilo67an'anaviy tozalash usullarining ta'sirini o'rganishda olma sharbatining kislotaliligida sezilarli o'zgarishlar topilmadi.
1-jadvalda keltirilgan natijalar shuni ko'rsatadiki, laksa bilan ishlov berilgan olma sharbatining umumiy eriydigan qattiq moddalar (TSS) qiymati ishlov berilmagan namunadagidan yuqori bo'lgan. Bu natijalar nashr etilgan tadqiqotlarga mos keladi.68Bundan tashqari, 1-jadvalda ko'rsatilganidek, nazorat olma sharbati guruhining TSS qiymati dastlabki vaqt nuqtasida 9,58 ni tashkil etgan va saqlash muddati tugagach, 11,05 ga yetgan. Bu qiymatlar Hamid va boshqalar tomonidan xabar qilingan yangi olma sharbatining TSS qiymatlaridan pastroq.69(mos ravishda 11,2 va 11,80). Lakkaze bilan ishlov berilgan olma sharbati namunalarining TSS qiymati sezilarli darajada oshdi, 11,23 dan boshlanib, 4°C da ikki hafta saqlangandan so'ng 12,93 ga yetdi (1-jadval). Saqlash paytida TSS ning shunga o'xshash o'sishi sitrus mevalari, limon va shirin apelsinlarda ham kuzatildi. Saqlash paytida umumiy eruvchan qattiq moddalarning (TSS) ko'payishi polisaxaridlarning (kraxmal) monosaxaridlarga (shakar) gidrolizi, sharbatning suvsizlanishi tufayli konsentratsiyaning oshishi va sharbatdagi pektinning eruvchan qattiq moddalarga parchalanishi bilan bog'liq bo'lishi mumkin. Umumiy eruvchan qattiq moddalarning (TSS) ko'payishi, ehtimol, pektin yoki tsellyulozaning mos ravishda pektin yoki tsellyuloza tomonidan eruvchan shakarlarga aylanishi yoki kraxmalning shakarlarga gidrolizi natijasida hosil bo'lishi mumkin bo'lgan eruvchan shakarlarning ko'payishi bilan bog'liq, bu haqda Hamed va boshqalar xabar berishgan.69.Lakkazaning olma sharbatining xususiyatlariga ta'sirini vizual ravishda kuzatish mumkin, chunki lakkaza bilan ishlov berilgan olma sharbati ishlov berilmagan sharbatga qaraganda yaxshiroq oqimlilik va pastroq yopishqoqlikni namoyon etadi. Bu kuzatuv 1-jadvalda qayd etilgan; Ferment bilan ishlov berilgan namunaning yopishqoqligi 1,87 cP ni tashkil etdi, nazorat namunasining yopishqoqligi esa 2,95 cP ni tashkil etdi. Qovushqoqlikning bu sezilarli darajada pasayishi, ehtimol, pektinga o'xshash moddalarning suvni ushlab turish qobiliyatining yuqoriligi va birlashgan tarmoq tuzilishining shakllanishi bilan bog'liq.
Ushbu tadqiqotda lakkazaning olma sharbatining qizartirish indeksiga (BI) ta'siri spektrofotometr yordamida 420 nm da absorbsiyani o'lchash orqali o'rganildi. Natijalar 1-jadvalda ko'rsatilgan. Saqlash paytida, ishlov berilgan va ishlov berilmagan guruhlardagi olma sharbati namunalarining BI asta-sekin o'sish tendentsiyasini ko'rsatdi. BI qizartirish darajasini aks ettiradi va xizmat qilishi mumkinmuhimfermentativ va fermentativ bo'lmagan qizarish reaksiyalarining ko'rsatkichi. Saqlash paytida yutilish sezilarli darajada oshdi (P < 0,05). Saqlash oxirida,A420Nazorat va ferment bilan ishlov berilgan guruhlarda olma sharbati namunalarining qiymati mos ravishda taxminan 217% va 121% ga oshdi (1-jadval). Natijalar shuni ko'rsatadiki, ferment bilan ishlov berish jigarranglik darajasini taxminan 56% ga samarali ravishda kamaytirishi mumkin. Bezerra va boshqalarning natijalari.[19]] bizning natijalarimizga mos keladi; Ular olma sharbatini tiniqlashtirish uchun lakkaza-glutaraldegid-kokos tolasidan foydalanganlar va uning asl rangini 61% ga kamaytirganlar.
Meva sharbatlaridagi polifenollar inson tanasiga ijobiy ozuqaviy va terapevtik ta'sir ko'rsatsa-da, ular oqsillar bilan reaksiyaga kirishib, sharbatning xiralashishiga, cho'kishiga yoki xiralashishiga olib kelishi mumkin, shu bilan mahsulotning ta'mi va xushbo'yligini o'zgartiradi va uning saqlash muddatini qisqartiradi.71Ushbu tadqiqotning maqsadi Pleurotus ostreatus NRC 620 dan olingan lakkaza yordamida olma sharbatining fenol birikma miqdorini xavfsiz ravishda kamaytirish edi. 1-jadvalda keltirilgan natijalar shuni ko'rsatadiki, lakkaza bilan ishlov berilgan olma sharbatining umumiy fenol birikma miqdori 4 °C da saqlashdan oldin sezilarli darajada kamaygan. Bundan tashqari, o'rganilgan ikkala namunada ham saqlash vaqtida umumiy fenol birikma miqdori ham kamaygan (1-jadval). Sandri va boshqalar tomonidan olib borilgan tadqiqotlar.72ferment bilan ishlov berilgan olma sharbati o'zining antioksidant faolligini va fenol birikmalar tarkibini saqlab qolishi mumkinligini ko'rsatdi. Biroq, Lettera va boshqalar tomonidan olib borilgan tadqiqot natijalari.73apelsin sharbatini qo'ziqorinli lakkaza bilan davolash uning tarkibidagi fenolik birikmalar miqdorini 45% gacha kamaytirishi mumkinligini ko'rsatdi.
Fenol birikmalari erkin radikallarni yo'q qilish, singlet kislorodni qaytarish va susaytirish, vodorod atomini o'tkazish va erkin radikallarga elektron ehson qilish kabi xususiyatlarga ega ekanligi ko'rsatilgan, bu ularni kuchli antioksidantlarga aylantiradi.74Shuning uchun, ushbu tadqiqotda 14 kun davomida muzlatgichda saqlangan olma sharbatining antioksidant faolligiga lakkazaning ta'sirini baholash uchun DPPH va FRAP asosidagi usullar qo'llanildi (2-jadval). Ikkala usul ham saqlash vaqtida antioksidant faollikning oshishini ko'rsatdi, bu erkin fenol birikmalarining ko'payishi yoki Maillard reaksiya mahsulotlarining (MRP) hosil bo'lishi bilan bog'liq bo'lishi mumkin, Maillard reaksiya mahsulotlari esa antioksidant faollikning oshishiga sabab bo'lishi mumkin.75Fermentativ bo'lmagan jigarrang reaksiyalar (shu jumladan askorbin kislotasining parchalanishi, Maillard reaksiyalari va shakarlarning kislota katalizlangan parchalanishi) jigarrang pigmentlarni (melanoidinlarni) hosil qiladi. Oraliq askorbin kislotasining parchalanish mahsulotlari va shakarning parchalanish mahsulotlari (masalan, karbonil birikmalari) Maillard reaksiyalari orqali aminokislotalar bilan reaksiyaga kirishishi mumkin.76Saqlash paytida meva va sabzavotlarning jigarrang rangga bo'yalishi keng qamrovli o'rganilgan bo'lsa-da, bu reaksiyalar haqidagi tushunchamiz cheklanganligicha qolmoqda.77FRAP usuli bilan taqqoslaganda, lakkaza bilan ishlov berilgan olma sharbati DPPH usuli bilan sezilarli darajada past antioksidant faollikni ko'rsatdi (2-jadval) va barcha namunalarning antioksidant faolligi saqlash vaqti oshishi bilan sezilarli darajada oshdi. Ushbu tadqiqotda antioksidant faollikni aniqlashning ikki xil usuli qo'llanildi, chunki ularning tamoyillari farq qiladi. DPPH usuli erkin radikallarni neytrallashtirish qobiliyatini o'lchaydi, FRAP usuli esa temir ionlarini kamaytirish qobiliyatini o'lchaydi. Shuning uchun, o'rganilayotgan namunalarning antioksidant faolligini yaxshiroq tushunish uchun antioksidant faollikni aniqlash uchun bir nechta usullardan foydalanish tavsiya etiladi.78
Ushbu tadqiqotning asosiy natijalaridan biri shundaki, *Pleurotus ostreatus* lakkazasi NRC 620 70°C va pH 3.0 da optimal faollikni namoyon etadi. Sharbatni tiniqlashtirish uchun keng qo'llaniladigan boshqa qo'ziqorinli lakkazalar, masalan, *Trametes versicolor* va *Ganoderma lucidum* lakkazalari bilan solishtirganda, *P. ostreatus* NRC 620 yuqori issiqlik barqarorligi va kislotaliroq pH ni namoyon etadi. *Trametes versicolor* va *Ganoderma lucidum* dan olingan lakkazalar odatda 50-60°C oralig'ida va 3.5 va 5.0 oralig'idagi pH qiymatlarida optimal faollikni namoyon etadi. Bu farq, ayniqsa, past pH qiymatlarida barqarorlik juda muhim bo'lgan kislotali sharbatlar uchun sharbatni tiniqlashtirish samaradorligini oshirishga yordam berishi mumkin. *P. ning o'ziga xos xususiyati. Boshqa o'rganilgan qo'ziqorinli lakkazalar bilan solishtirganda, *Pleurotus ostreatus* NRC 620 qiyinroq sharoitlarda samarali ishlash qobiliyatini namoyish etadi. Uning yuqori optimal faollik harorati sanoat qo'llanmalarida potentsial afzalliklarni, masalan, tezroq reaksiya tezligi va mikrobial ifloslanishning kamayishini ko'rsatadi. Ko'pgina sharbatlarning kislotali tabiatiga juda mos keladigan past pH qiymati sharbatni tozalash jarayonlarida foydali bo'lishi mumkin. Ushbu natijalar keng ko'lamli qo'llanilishi uchun qo'shimcha tadqiqotlarni oqlaydi, bu esa *Pleurotus ostreatus* NRC 620 ni an'anaviy qo'ziqorin lakkasi manbalariga munosib alternativa qiladi. Avvalgi tadqiqotlar bilan taqqoslaganda, biz optimal harorat 60°C va optimal pH 3.0 ekanligini aniqladik. 60°C da 80 daqiqa davomida reaksiyadan so'ng, *Ganoderma lucidum* lakkasi saqlanib qoldi.46uning faolligining %.79 Kurniavati va Nicelle ma'lumotlariga ko'ra80, *Ganoderma lucidum* fermentlari 25°C va pH qiymatlari 5.0 dan 8.0 gacha bo'lgan haroratlarda a'lo darajadan o'rtacha darajagacha barqarorlikni, pH 6.0 va 10 dan 30°C gacha bo'lgan haroratlarda esa barqarorlikni namoyon etadi. Ushbu tadqiqotda biz *Pleurotus ostreatus* uchun ferment faolligi uchun optimal pH va harorat mos ravishda 3.0 va 70°C ekanligini aniqladik. Ikki soat davomida 40°C va 50°C da inkubatsiya qilingandan so'ng, ferment o'z faolligining mos ravishda 68.33% va 59.61% ni saqlab qoldi. Bundan tashqari, Pleurotus ostreatus NRC 620 lakkazasi 50°C dan 80°C gacha bo'lgan keng harorat oralig'ida yuqori faollikni namoyish etdi va deyarli maksimal faollikka (69%–98%) erishdi, maksimal faollik esa 70°C da kuzatildi.
Xulosa qilib aytganda, statik sharoitlarda olingan ustritsa qo'ziqorini lakkazasi NRC620 turli xil pH va harorat sharoitlarida optimal faollik va barqarorlikni namoyish etdi, bu boshqa ferment manbalariga nisbatan yuqori barqarorlikni namoyish etdi. 10 mM MgSO₄ va CuSO₄ qo'shilishi ferment faolligini mos ravishda taxminan 21% va 35% ga oshirdi. Olma sharbatiga qayta ishlanganda, ferment pH va yopishqoqlikni pasaytirdi, fenol miqdori esa saqlash vaqtida biroz kamaydi.
Natijalar lakkasening oziq-ovqat sanoatida, ayniqsa ichimliklarni tiniqlashtirishda salohiyatini tasdiqlaydi. Fenol birikmalarini maxsus parchalash orqali lakkase nafaqat xiralikni kamaytiradi va tiniqlikni yaxshilaydi, balki yumshoq ish sharoitlarida meva sharbatlarining sifatini ham saqlab qoladi. Jelatin, bentonit va silika geli kabi an'anaviy tiniqlashtiruvchi vositalardan farqli o'laroq, lakkase chiqindilarni hosil qilmaydi yoki ichimliklardan yoqimli hidlarni yo'qotmaydi, bu esa uni ekologik jihatdan toza va barqarorroq variantga aylantiradi. Bundan tashqari, boshqa fermentlar va filtrlash usullari bilan solishtirganda, lakkase mahsulot sifatiga putur yetkazmasdan maqsadli va tejamkor yechimni taklif etadi.
Kyomuhimbo, HD va Brink, HG. Mis tutgan lakkazalarning qo'llanilishi va immobilizatsiya strategiyalari; sharh. Heliyon 9, e13156 (2023).
Nashr vaqti: 2025-yil 15-dekabr